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Le polymorphisme de la longueur des fragments de restriction (RFLP) est une méthode moléculaire d’analyse génétique qui permet d’identifier les individus en fonction de modèles uniques de coupure des enzymes de restriction dans des régions spécifiques de l’ADN.
Aussi appelée analyse RFLP, cette technique tire parti des polymorphismes du code génétique des individus. Même si tous les membres d’une espèce ont essentiellement la même constitution génétique, ces légères différences expliquent les variations de phénotype, telles que l’apparence ou le métabolisme, entre les individus.
Technique d’analyse RFLP
La technique d’analyse RFLP consiste à couper une région particulière de l’ADN dont la variabilité est connue, à l’aide d’enzymes de restriction, puis à séparer les fragments d’ADN par électrophorèse sur gel d’agarose et à déterminer le nombre de fragments et leur taille relative.
Une enzyme de restriction est une enzyme, une molécule de protéine, qui coupe l’ADN aux sites de restriction. En substance, l’échantillon d’ADN est brisé et digéré par les enzymes de restriction. Les fragments qui en résultent sont séparés en fonction de leur longueur, et la taille des fragments diffère pour chaque individu testé.
Le processus RFLP complet nécessite le marquage des sondes, la fragmentation de l’ADN, l’électrophorèse, le buvardage, l’hybridation, le lavage et l’autoradiographie. Le RFLP détecté est visualisé à l’aide d’un film radiographique en autoradiographie, où les fragments d’ADN peuvent être visualisés et analysés après avoir été séparés les uns des autres par électrophorèse.
Demande d’utilisation du RFLP
Voici quelques-unes des demandes d’analyse RFLP :
- Empreintes génétiques : Les scientifiques de la police scientifique peuvent utiliser l’analyse RFLP pour identifier des suspects à partir d’échantillons de preuves recueillis sur les scènes de crime.
- Paternité : Le RFLP est également utilisé pour la détermination de la paternité ou la recherche de l’ascendance.
- Diversité génétique : Cette technique peut être utilisée pour étudier l’évolution et la migration de la faune, pour étudier les schémas de reproduction des populations animales et pour détecter et diagnostiquer certaines maladies.
La technique de détection de la variation des génomes par RFLP est un outil essentiel pour la cartographie du génome et l’analyse des maladies génétiques. Si l’on cherche à localiser le gène d’une maladie particulière dans un certain chromosome, les chercheurs analysent l’ADN des membres d’une famille atteints de la maladie, puis recherchent des schémas d’héritage similaires dans les allèles RFLP.
Une fois qu’un gène de la maladie est localisé, l’analyse RFLP sur d’autres membres de la famille pourrait révéler un porteur des gènes mutants ou signaler un risque global de maladie. Il est important de noter que la technique RFLP n’est plus très utilisée maintenant que des techniques plus récentes et plus robustes sont utilisées pour l’analyse de l’ADN en médecine légale et dans plusieurs autres domaines.
Aspects négatifs de la RFLP
Malheureusement, la technique d’analyse RFLP est fastidieuse et lente. Outre le fait qu’elle nécessite une grande quantité d’ADN – l’échantillon doit généralement avoir la taille d’une pièce de 25 cents, ce qui est relativement important pour les échantillons d’ADN – le processus, de l’étiquetage des sondes au lavage et à l’autoradiographie, peut prendre jusqu’à un mois complet.
Les résultats du projet sur le génome humain ont pratiquement remplacé le besoin de RFLP. Le projet a permis de déterminer la séquence complète de l’ADN trouvé dans les cellules humaines, le génome humain, et d’identifier tous les gènes du génome humain.
